零感染、零失误！来自超110万管的核酸检测质量控制经验分享

作者：王泽友[1]王思思[2]

指导专家：唐玲丽 教授[1]

单位：[1] 中南大学湘雅二医院[2] 湖南省脑科医院

最近频繁曝出关于新冠核酸检测质量问题的报道，新冠核酸检测的质量控制尤显重要。笔者曾作为湖南省支援吉林核酸检测队的一员，逆行奔赴2000多公里，在长春奋战40天，做到了零感染、零失误，圆满完成超过110万管的新冠核酸检测任务。现将笔者在长春气膜实验室工作期间，对高风险地区大规模新冠核酸筛查的质量控制经验进行总结分享。

前言

随着国内新冠肺炎疫情防控措施的加大，常态化核酸检测筛查已成为当前的主要防控手段，而气膜实验室成为了大规模新冠核酸筛查的主战场。气膜实验室具有搭建简便、可移动等优势，其每个仓每日检测量最高可达10万管，每日最高可检测200万人份，是目前大规模人群核酸筛查的有效手段。

虽然气膜实验室同属于PCR实验室，具备PCR实验室基本的功能分区设置。但是又与常规的PCR室存在区别，具有其自身的特点。

首先，气膜实验室内无供水系统，也缺乏污水处理系统，不便于实验室内部的清洁与消杀。

其次，气膜的灵活性致使其搭建位置多变，可置于大型室内场馆等多种场地，气膜本身配备的温度调节系统受搭建位置、周围环境以及气候等诸多因素影响较大。

此外，临时搭建的气膜实验室往往存在仪器多、品牌杂、人员组成层次不一、每日检测样本量大、工作时间长、舱内操作人员较多等问题，这些都进一步加大了气膜实验室的质量控制难度，因此需从多方面进行质量把控。

质控要点一：人员

核酸检测人员是新冠核酸筛查中质量控制的重要环节。人员的专业知识储备、工作经验、工作态度以及身体状况等都是人员质量控制的关键要素。本次长春气膜实验室为临时搭建，其内核酸检测工作人员为紧急抽调，来自多家医院，年龄从20岁至50岁不等，专业领域不同，工作经验参差不齐。因此针对以上特点，我们主要从以下方面进行把控：

1、 分析人员特点，做到专人专岗。

（1）根据新冠核酸检测流程，制定合理合适的岗位，如试剂配制岗、标本签收岗、样本加样岗、核酸提取岗、核酸加样岗、上机扩增岗、结果审核岗等。

（2）全面了解队员情况，包括年龄、身体状况、专业领域、工作年限、是否有丰富的新冠核酸检测经验等。根据队员的自身特点予以固定岗位，尽量减少人员岗位流动。如年轻、体力好的队员主要安排在需要穿戴防护服的二区；年龄稍大或体能略差的队员主要安排在一区或三区；具有较为丰富PCR室工作经验的队员则负责结果的审核；具有较为丰富大规模核酸检测经验的队员则负责加样和核酸提取等岗位；核酸检测工作经验不足的队员则考虑放于标本流转岗或核酸点样岗等。

2、 加强人员培训，保证生物安全和质量安全。

（1）对全体队员统一进行生物安全培训，穿脱防护服培训，防范生物安全风险，保证人员不被感染。

（2）对同组人员进行统一的实验流程和仪器操作培训，同时强化岗位人员对应仪器操作培训，确保同组人员熟悉流程，专岗人员熟悉仪器，避免人员操作失误引起的质量问题。

3、 设立组长岗位，及时优化各项检测流程。

各区设立负责人，协调各岗位工作，规范各项操作，并处理突发应急事件。组长密切关注检测队员的身体和思想状况，及时开导队员和优化调整流程，避免人为失误。

质控要点二：仪器

仪器是保证新冠核酸检测质量的另一个重要因素。本次气膜实验室使用的提取仪、扩增仪较多，且来自多个品牌厂家。主要关注以下几点：

1、 调试仪器，确保性能。因临时搭建的气膜实验室内的仪器设备多为其它地区调用，经过长途运输。故各个品牌的仪器在使用前均需调试到位，并做好性能验证，确保仪器运行顺畅。

2、 培训人员，熟悉仪器性能。实验前相应工程师做好人员培训，确保各岗位操作人员均已熟练掌握该岗位仪器的基本特点、工作原理、操作流程以及简单的故障处理等。如了解提取仪或扩增仪的时间周期，便于合理分配仪器，提高效率。

3、 及时维护仪器，做好应急预案。因气膜实验室工作量大，工作时间长，应及时维护仪器，保证仪器运行状态良好。各品牌仪器工程师随时待命，保持联系，确保仪器出现故障时能及时解决。

质控要点三：试剂和耗材

试剂和耗材的选取直接影响到核酸检测的质量。本次气膜实验室选用了多个厂家的试剂与耗材。其特点各有不同，主要从以下方面予以关注：

1、 熟悉试剂品牌，清楚性能参数。详细阅读各品牌试剂说明书，熟悉其荧光通道选择，扩增程序设置，扩增时长，有助于扩增仪的分配及结果解读。确保试剂均在有效期内，并确保为合格批次。

2、 匹配合适耗材，保证检测质量。选用性能好、质量好且与仪器适配的耗材，确保检测结果的稳定可靠。例如，使用顶部采光PCR仪时需保证PCR管/板的顶盖透明，且不能用记号笔标记文字，以免影响采光；而侧壁采光的PCR仪则需选择管壁透光的PCR管/板，此时标记顶盖不影响实验结果。

3、 关注试剂存储条件，保证试剂效能。因气膜实验室对试剂、耗材需求量大，且为临时搭建，故其试剂、耗材的存储库房多为临时选取。此时，应同时做好试剂的存储条件控制，特别是常温放置的提取试剂，在室温过低或者过高的情况下，对其影响较大。

4、 配置试剂时应充分混匀，并匹配试剂及标本量，尽量保证试剂现配现用。

质控要点四：环境

气膜实验室搭建的位置可位于室内，如：体育馆、会展中心等较大空间场所，受环境温度影响较大。气膜实验室也可放置于室外，室外放置除了受环境温度的干扰外，还需考虑天气带来的影响，如雨雪、高温、极寒等恶劣的天气都会直接影响到气膜实验室的使用。以下主要基于室内搭建的气膜实验室，具体分享核酸检测的质量控制要点。

1、 关注环境温湿度及各区压力值。每班次进行温湿度及压力登记，确保实验室正常运转，仪器设备运行环境稳定。

2、 做好环境消杀工作，保证环境符合要求。因气膜实验室无供水系统，可配备大瓶桶装水，随清洁工具一同携带进仓。稀释84消毒液，喷洒地面，对地面进行清洁。使用75%酒精对实验室台面、仪器表面进行清洁。实验室无人时可使用紫外灯对实验室进行全面照射至少1小时。

3、 进行环境采样，多点监测。每班次进行环境监测，多点采样，涵盖传递窗、门把手、扩增仪、实验台、电脑、鼠标等人员易接触的部位，监控环境清洁程度。根据监测结果及时对环境进行监控与处理。

4、 由于气膜实验室的温度受环境温度影响较大，特别是3区扩增仪器较多，温度变化较大，需提前做好应急预案。各区加装空调，用于调试环境温度，确保仪器运行正常以及人员工作舒适。

质控要点五：结果审核

结果审核，是新冠核酸检测质量控制的最后一关，也是最重要的一关。此次长春疫情呈现出阳性标本多，病毒载量高，疫情持续时间长的特点。

在此情况下，要求审核者不仅要充分掌握PCR的工作原理、结果判读规则，还要及时分析和处理实验中出现的诸多异常曲线，并对标本进行复核，在样本量大、阳性率高的高强度工作情况下保证结果准确和及时发布。主要从以下几个方面注意：

1、 关注阴、阳性质控结果。保证质控在控的前提下对实验结果予以分析。

2、 使用第三方弱阳性质控对整个过程进行监控，并保证质控随样本一同参与提取，尽量位置随机放置。同时需关注第三方质控适配的扩增试剂品牌，避免因试剂不匹配造成的弱阳性质控失控。另外，还需定期参加当地质量监管部门组织的室间质评，确保核酸检测的准确性。

3、 结果审核过程中关注异常曲线。阳性率高的地区大规模筛查时，会因各种原因产生异常扩增曲线，正确分析出现异常曲线的可能原因，并及时采取响应的解决方案，能够有效减少样本复查，缩短样本TAT时间，保证结果的及时发布。

4、 重点关注翘尾曲线。阳性率高的地区大规模筛查时，对于根据试剂盒可判读为阴性的翘尾曲线（无Ct值或Ct值极高的情况）应重点关注。因人群中的无体育bd感染者或感染初期患者，病毒载量低，且大规模筛查时多采用10或20混1的采样方式，同一采集管内拭子多，可能在检测时出现曲线翘尾现象。此时也应按照复查流程，使用灵敏度更高的检测试剂，在充分混匀之后，予以双孔双试剂复查。据本次气膜实验室前期的检测数据统计，374例单基因起跳的样本，复查后23.5%的标本为阳性；318例翘尾样本，复查后6.3%的样本为阳性。

5、 详细填写样本流转单，包括加样人、加样板数、提取人、提取仪编号、扩增仪编号、阳性位置号及Ct值等，便于复查标本的复核以及标本的追踪。

6、 阳性结果需双人复核，并严格进行双孔双试剂复查，且将同板次的其它标本暂存，待结果复核完成后再予以处理。若某一阳性标本复核为阴性，则应对整板标本全部复核，严谨对待每一例报告结果。

总结

当前，全国疫情防控进入常态化阶段，对核酸检测能力提出了更高要求。如何使新冠核酸检测的大规模筛查及日常人群筛查工作既保“量”又保“质”，是每一个新冠核酸检测实验室所面临的问题。新冠核酸检测是一个涉及到多人员、多环节的连续过程。实验室要从细节出发，充分分析每一个节点的风险因素，从“人、机、料、法、环”多角度全方位对整个过程进行监控，才能保证整个结果的真实、可靠，以及结果的按时、及时发布。

专家点评

胡敏 教授中南大学湘雅二医院检验医学科主任

本文作者是中南大学湘雅二医院援吉林长春核酸检测医疗队队员；自2019年底新冠疫情爆发起，作者就一直作为核酸检测骨干坚守在临床和抗疫一线；作者具有扎实的专业基础和丰富的临床经验，对疫情管控状态和常态下的核酸检测流程和风险均能通过各个方面的质量控制进行识别和改进。在这次援助长春疫情时，作为团队的中坚力量，主要负责结果判读和发布；由于大规模检测与常规医院实验室在人、机、料、法、环和测几个方面都突显了不同，需要根据现场情况灵活判断和运用各种质量管理工具，保证检测结果的准确性，避免假阴性和假阳性的出现，因此，作者通过对援吉林核酸检测工作的总结，向同行们传递了一种在应急状态下如何做好质量控制的思路和方法，条理清楚可操作性强，值得借鉴。

邹国英 教授湖南省脑科医院（湖南省第二人民医院）医学检验科主任

本文作者先后参加了河南安阳、吉林长春的抗疫工作，积累了丰富的大规模新冠核酸检测的实战经验。文中从全过程质量控制着眼，通过“人、机、料、法、环”多角度全方位分析，保证大规模新冠核酸筛查结果的真实、可靠。本文针对战备时期气膜实验室的优缺点，点对点地分析了实战过程中的问题，并提出了具体解决措施，能有效克服气膜实验室的质量控制难度，其经验值得推广使用。

周细国 教授湖南省援吉核酸检测总领队、湖南省临检中心党支部书记

全国疫情防控进入常态化阶段，气膜实验室作为大规模筛查的主战场，在新冠核酸筛查实验中的质量控制对于疫情防控尤为重要。本次湖南省援吉林核酸检测医疗队在长春气膜实验室工作期间，团队人员合理分工，配合默契，不断优化实验流程，做到了零感染、零失误。本文作者作为援吉核酸检测医疗队队员，在新冠核酸检测质量控制方面具有丰富的实战经验。作者从实际工作出发，通过“人、机、料、法、环”多个方面分析并介绍了气膜实验室核酸检测质量控制的要点，其内容详尽、思路清晰，值得广大同仁借鉴与学习。